血清中蛋白多肽提取方法 (推荐)
(1)从4℃冰箱中取出 SPE-CM磁珠悬浮液一管,反复倒置,使磁珠完全、均匀的悬浮于液相中。
(2)在200ul样品管中加入2ul SPE-CM磁珠混悬液,95ul SPE-CB、5ul 血清,反复吸打数次,使磁珠与SPE-CB、血清混合均匀,室温静置5min。将样品管置于磁珠分离器上,使磁珠贴壁1min,磁珠与液体分离,待液体澄清后,吸净液体。
(3)将步骤(2)中的样品管从磁珠分离器上移走,并在上述样品管中加入100ul SPE-CW,反复吸打数次,使磁珠与SPE-CW混合均匀,室温静置2min。将样品管转移到磁珠分离器上,使磁珠贴壁1min,磁珠与液体分离,待液体澄清后,吸净液体。
(4)重复步骤(3)两次,吸净液体。
(5)将步骤(4)中的样品管从磁珠分离器上移走,并在上述样品管中加入10ul SPE-CE (由SPE-CE1、SPE-CE2 组成),反复吸打10次之上,使磁珠与SPE-CE混合均匀,室温静置5min。
SPE-CE配制方法举例:
将1ul的SPE-CE1加入到99ul的SPE-CE2中,混合均匀,72小时之内使用。(SPE-CE1、 SPE-CE2易挥发,应密封阴凉干燥保存。)
(6)将步骤(5)中的样品管转移到磁珠分离器上,使磁珠贴壁1min,磁珠与液体分离,待液体清澈后,将液体移入干净的样品管中。
(7)步骤(6)中的液体可以用来直接进行质谱分析或冻存于-20℃,24小时之内进行质谱分析。
注意事项:
(1)取磁珠时务必保证磁珠与液相混合完全、均匀。
(2)吸打过程中应尽量避免泡沫产生。
(3)吸净液体的操作中,枪头应避免接触到磁珠,以免吸走磁珠。
血清多肽谱图见图2。

另还有尿液、腹水、淋巴液等样品的提取推荐方法,欢迎来电来信索取! |